Une méthode de coloration
plus performante que celle au bleu de méthylène
16/11/1998
La pratique de l'électrophorèse
sur gel d'agarose de fragments de restriction d'ADN est réalisable
au lycée en raison notamment de la disponibilité d'une
méthode de coloration des gels alternative à celle par le
bromure d'éthidium, produit dangereux et qui nécessite de
surcroît une rampe à UV. Cette méthode alternative
utilise le bleu de méthylène et donne de bons résultats
mais la durée de décoloration du fond est longue et le gel
conserve une couleur de fond assez soutenue qui gêne parfois la visualisation
des bandes.
Pour pallier ces inconvénients, un autre colorant peut être
employé. Il s'agit de l'Azure A en solution alcoolique. Celui-ci
colore l'ADN en quelques minutes et la décoloration du gel est également
très rapide. En outre, le gel reste clair après cette opération
et les bandes, même très pâles, peuvent être identifiées
aisément.
L'Azur A est disponible chez SIGMA (référence A 6270, 1 g
: 62.00 FF HT)
Coloration et décoloration
Recouvrir la surface du gel avec le colorant.
Laisser agir exactement 4 minutes puis vider le colorant (qui reste réutilisable).
Éliminer l'excès de colorant de la surface avec quelques
mL d'alcool à 70 % ou d'alcool à brûler pendant quelques
secondes.
Éliminer l'alcool puis rincer à l'eau du robinet.
Rincer plusieurs fois pour éliminer totalement le colorant.
On voit apparaître les bandes en quelques minutes mais l'intensité
maximale de coloration est atteinte au bout de quelques heures. Laisser
le gel dans une boîte étanche avec quelques gouttes d'eau
pour éviter la dessication.